DESAIN PRIMER SECARA IN SILICO UNTUK AMPLIFIKASI GEN CRY III DARI BACILLUS THURINGIENSIS ISOLAT LOKAL

Berbagai jenis isolat dan subspesies B. thuringiensis sangat dikenal sebagai sumber yang bernilai untuk biopestisida penting komersial. Bakteri ini memenuhi syarat sebagai agen pengendali mikrobiologi terhadap hama dan vektor penyakit tumbuhan sehingga aplikasi biopestisida ini cepat tersebar. Hal itu karena di dalam B. thuringiensis terdapat beberapa gen yang menyandi suatu protein yang resisten terhadap hama tertentu. Salah satunya yaitu gen cryIII yang mampu membunuh Coleoptera sebagai hama di ubijalar. Metode yang bisa digunakan untuk amplifikasi gen cryIII adalah PCR. Salah satu komponen penting dalam PCR adalah primer. Penelitian ini bertujuan untuk membuat desain primer yang sesuai untuk amplifikasi gen cryIII menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR). Primer dirancang menggunakan perangkat Primer Blast yang ada di dalam website National Center for Biotechnology Information (NCBI). Primer yang telah dirancang kemudian dianalisis untuk spesifisitasnya dengan BLAST dan struktur dimer dengan DINAmelt. Analisis dengan alat UNAfold digunakan untuk menentukan struktur sekunder di situs penempelan primer dari amplikon yang dihasilkan. Analisis struktur sekunder menunjukkan tidak ada struktur sekunder di situs penempelan primer yang telah dirancang. Satu primer yang dapat mengamplifikasi gen cryIII dari B. thuringiensis berhasil dirancang. Optimasi lebih lanjut dari primer di lab basah diperlukan untuk menghasilkan reaksi PCR yang baik


Alt. Description

Many types of Bacillus thuringiensis isolates and subspecies are well-known as valuable sources for important commercial biopesticides. These Bacteria are qualified as microbiological control agents to against pests and plant disease vectors. It was because in B. thuringiensis there are several genes that encode a protein that was resistant to certain pests. One of them was cryIII gene, that was able to kill Coleoptera as a pest in sweetpotato. The method can be used for cryIII gene amplification is Polymerase Chain Reaction (PCR). Primer is one important component in PCR. The aim of this research was to make a primer design for cryIII gene amplification using PCR. The Primers were designed using Primary Blast tool on the National Center for Biotechnology Information (NCBI) website. The Primers that have been designed then analyzed for their specificity with BLAST and dimer structure with DINAmelt. Analysis using the UNAfold was used to determine the secondary structure at the primer-binding site of the amplicon. Secondary structure analysis showed that there is no secondary structure at primer-binding site for primer. One primer that can amplify cryIII gene from B. thuringiensis was successfully designed. Further optimization of primer in the wet lab is needed to produce a good PCR reaction.

1.  UEU-Journal-17178-11_0540.pdf - 774 KB